拟南芥遗传转化

拟南芥转基因
   　当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化(载体法),区别主要是转化的方法不同,有抽真空,花序浸染和喷雾法使用最为广泛。
农杆菌介导转化的基本流程
农杆菌(目标载体)液的制备
　拟南芥种植→花期(侵染)→共培养→收种→验证
农杆菌制备
　1)从-80℃冰箱中取出lml农杆菌。
　2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素 )Kan)和100mg/L的利福平 )Rif)。
　3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中,28℃振荡10h。
　4)拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS,加蔗糖50g/L,PH值调至5.7。然后在15p压力下蒸汽灭菌15min,灭菌结束,冷却后保存于4℃,以待转基因使用。
转化
花序浸染
验证
　1.种子筛选。将收到的种子种植于含有筛选剂(卡那霉素/潮霉素等)的培养基上,筛选出抗性幼苗。
　　2.PCR。提取拟南芥基因组,进行PCR扩增,核酸电泳观察有无目的基因。
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